生物素親和素3篇
生物素親和素篇一：生物素標記蛋白操作方法
下面的操作方法可以使約3－5分子的生物素與1分子的蛋白結合，對某些蛋白來說，生物素與蛋白的分子比可根據不同的生物素化要求進行調整。
1、溶解2－10mg蛋白於1ml的BuphTm磷酸鹽緩衝液中，並計算溶解的毫摩爾數。如果蛋白含有不恰
當的緩衝液（如Tris或者甘氨酸），可以通過在PBS中透析或濃縮的方法除去。計算：蛋白質量（mg）/蛋白分子量（MW）＝蛋白質的毫摩爾數。
2、在開啟之前，平衡生物素至室溫。加2mgSulfo-NHS-Biotin於100ul超純水中，加入足夠量濃度的
生物素，一般對於10mg/ml蛋白來說超過12倍分子數，對於2mg/ml蛋白溶液應超過20倍，或者該試劑也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中。（見下表）
3、室溫30分鐘，或冰上放置2小時。
4、用30mlPBS預洗純化柱，上樣，加入與欲收集量相同的緩衝液，收集0.5ml或1ml於單獨的管中。5、以280nm的吸收值測定蛋白含量。
6、生物素化的蛋白4℃存放至使用，可加入疊氮鈉、甘油等儲存。
HABA法檢測生物素標記效果
試劑配製：①PBS（100mM磷酸鹽，150mMNaclPH7.2）
②HABA/親和素溶液：10mg親和素、600ul10mMHABA於19.4ml的PBS中，該溶液的A500
大約在0.9-1.3之間，溶液於4℃儲存可穩定2周。如果有沉澱形成（HABA溶液）可過濾後使用。
比色法檢測生物素/蛋白質摩爾質量比：
1、吸取900ulHABA/親和素溶液於1ml比色杯。
2、測定該溶液在500nm處的吸收值並記錄為“A500HABA/Avidin”。3、吸取100ul生物素標記的蛋白於杯中並測定500nm的吸光度值，記為A500HABA/Avidin/Biotin(數
值必須恆定15s以上)如果A500HABA/Avidin/Biotin的值不超過（≤）0.3，重新稀釋待測樣品並檢測。
注：計算結果時必須考慮稀釋度。4、計算Biotin/Protein摩爾比
①A=生物素化的蛋白毫摩爾濃度＝蛋白濃度（mg/ml）/蛋白的分子量②B=500nm處的吸光度變化
△A500=（0.9×A500HABA/Avidin）-A500HABA/Avidin/Biotin
③C=生物素的毫摩爾濃度=mmolBiotin/ml反應溶液=△A500/（34,000×光程）④Biotin/Protein摩爾比=C·10·稀釋倍數/A
生物素親和素篇二：生物素-親和素系統(BA5)放大作用的機制主要是
一、整體解讀
試卷緊扣教材和考試說明，從考生熟悉的基礎知識入手，多角度、多層次地考查了學生的數學理性思維能力及對數學本質的理解能力，立足基礎，先易後難，難易適中，強調應用，不偏不怪，達到了“考基礎、考能力、考素質”的目標。試卷所涉及的`知識內容都在考試大綱的範圍內，幾乎覆蓋了高中所學知識的全部重要內容，體現了“重點知識重點考查”的原則。
1．迴歸教材，注重基礎
試卷遵循了考查基礎知識為主體的原則，尤其是考試說明中的大部分知識點均有涉及，其中應用題與抗戰勝利70週年為背景，把愛國主義教育滲透到試題當中，使學生感受到了數學的育才價值，所有這些題目的設計都回歸教材和中學教學實際，操作性強。
2．適當設定題目難度與區分度
選擇題第12題和填空題第16題以及解答題的第21題，都是綜合性問題，難度較大，學生不僅要有較強的分析問題和解決問題的能力，以及紮實深厚的數學基本功，而且還要掌握必須的數學思想與方法，否則在有限的時間內，很難完成。
3．佈局合理，考查全面，著重數學方法和數學思想的考察
在選擇題，填空題，解答題和三選一問題中，試卷均對高中數學中的重點內容進行了反覆考查。包括函式，三角函式，數列、立體幾何、概率統計、解析幾何、導數等幾大版塊問題。這些問題都是以知識為載體，立意於能力，讓數學思想方法和數學思維方式貫穿於整個試題的解答過程之中。
生物素親和素篇三：生物素-親和素系統放大作用的主要機制是
一、整體解讀
試卷緊扣教材和考試說明，從考生熟悉的基礎知識入手，多角度、多層次地考查了學生的數學理性思維能力及對數學本質的理解能力，立足基礎，先易後難，難易適中，強調應用，不偏不怪，達到了“考基礎、考能力、考素質”的目標。試卷所涉及的知識內容都在考試大綱的範圍內，幾乎覆蓋了高中所學知識的全部重要內容，體現了“重點知識重點考查”的原則。
1．迴歸教材，注重基礎
試卷遵循了考查基礎知識為主體的原則，尤其是考試說明中的大部分知識點均有涉及，其中應用題與抗戰勝利70週年為背景，把愛國主義教育滲透到試題當中，使學生感受到了數學的育才價值，所有這些題目的設計都回歸教材和中學教學實際，操作性強。
2．適當設定題目難度與區分度
選擇題第12題和填空題第16題以及解答題的第21題，都是綜合性問題，難度較大，學生不僅要有較強的分析問題和解決問題的能力，以及紮實深厚的數學基本功，而且還要掌握必須的數學思想與方法，否則在有限的時間內，很難完成。
3．佈局合理，考查全面，著重數學方法和數學思想的考察
在選擇題，填空題，解答題和三選一問題中，試卷均對高中數學中的重點內容進行了反覆考查。包括函式，三角函式，數列、立體幾何、概率統計、解析幾何、導數等幾大版塊問題。這些問題都是以知識為載體，立意於能力，讓數學思想方法和數學思維方式貫穿於整個試題的解答過程之中。
